Такође се назива РФЛП анализа, техника користи полиморфизме у генетским кодовима појединачних људи. Иако сви чланови неке врсте имају суштински исту генетичку структуру, ове мале разлике узимају у обзир варијације у фенотипу, попут појаве или метаболизма, између појединаца.
РФЛП: Техника анализе и примене
РФЛП анализа укључује сечење одређеног региона ДНК са познатом варијабилношћу, са рестрикционим ензимима, затим одвајање фрагмената ДНК електрофорезом агарозног гела и одређивање броја фрагмената и релативних величина.
Рестриктивни ензим је ензим, протеински молекул, који смањује ДНК на местима рестрикције. У суштини, узорак ДНК се разбије и дигестира од рестрикционих ензима. Резултујући фрагменти су раздвојени у складу са њиховом дужином, а обрасци величине фрагмента ће се разликовати за сваку појединачну тестирану.
Пуни процес РФЛП захтева означавање сонде, фрагментацију ДНА, електрофорезу, блотовање, хибридизацију, прање и ауторадиографију. Откривени РФЛП се визуализира коришћењем рендгенског филма у ауторадиографији, где се фрагменти ДНК могу посматрати и анализирати након што се електрофореза одвајају једна од друге.
Неке од апликација за РФЛП анализу укључују:
- ДНК отисак прстију . Форензички научници могу да користе РФЛП анализу како би идентификовали осумњичене на основу узорака доказа прикупљених на сцени злочина.
- Отац. РФЛП се такође користи у одређивању очинства или за праћење поријекла.
- Генетска разноликост. Техника се може користити у проучавању еволуције и миграције дивљих животиња, проучавању узгоја у популацији животиња и откривању и дијагнози одређених болести.
Техника коришћења РФЛП детекције варијација у геноме је витално средство за мапирање генома и анализу генетских болести. Ако се локација одређеног гена за болест тражи у одређеном хромозому, истраживачи ће анализирати ДНК чланова породице са болестима, потом потражити сличне обрасце наслеђивања у РФЛП алелима.
Једном када је ген за болест локализован, спровођење РФЛП анализе на другим члановима породице може открити носач мутантних гена или сигнализирати укупни ризик од обољења. Важно је напоменути да РФЛП техника није широко коришћена сада када се за анализу ДНК у форензичкој науци и неколико других поља користе нове, робусније технике.
Негативан аспект анализе
Нажалост, техника РФЛП анализе је досадна и спора. Поред тога што захтева велику количину узорка ДНК - узорак би обично требало да буде око величине четвртине, која је релативно велика за узорке ДНК - процес, од ознаке сонде до прања и ауторадиографије, може потрајати до цео месец да се заврши.
Резултати пројекта Хуман Геноме су прилично заменили потребу за РФЛП. Пројекат је омогућио одређивање цјелокупне секвенце ДНК која се налази у људским ћелијама, људском геному и за идентификацију свих гена у људском геному.