Како се ове ендонуклеазе истичу
Колико знате о ензимима за ограничење? Добијете боље разумевање шта раде и зашто су важне, са овим прегледом.
Дефинисање рестрикцијских ензима
Рестриктивне ендонуклеазе су класе ензима који смањују ДНК молекуле. Сваки ензим препознаје јединствену секвенцу нуклеотида у ДНК склопу. Такве секвенце су обично око 4 до 6 базних парова. Секвенце су палиндромске јер комплементарна ДНА дужина има исти низ само у супротном правцу.
Другим ријечима, оба дна ДНК-а секају на истој локацији.
Где се налазе ови ензими
Ограничења ензима налазе се у многим различитим врстама бактерија, гдје је њихова биолошка улога учествовати у одбрани ћелија. Ови ензими "ограничавају" страну (нпр. Вирусну) ДНК која улази у ћелију, уништавајући их. Ћелија домаћин има систем за модификацију ограничења који метилује сопствену ДНК на местима специфичним за своје одговарајуће ензиме за ограничење, чиме га штити од цепања. Откривено је више од 800 познатих ензима које препознају више од 100 различитих нуклеотидних секвенци.
Употреба у биотехнологији
Рестриктивни ензими се користе у биотехнологији како би се смањила ДНК у мање прамене, како би се проучиле разлике дужине фрагмената међу појединцима (Полиморфизам дужине фрагментације ограничења - РФЛП). Користе се и за клонирање гена.
РФЛП технике су коришћене да би се утврдило да појединци или групе појединаца имају значајне разлике у генским секвенцама и узорцима ограничења раста у одређеним областима генома.
Познавање ових јединствених области је основа за отиске прстију . Свака од ових метода зависи од употребе електрофорезе агарозног гела за одвајање фрагмента ДНК. ТБЕ пуфер, који се састоји од базе Трис, борне киселине и ЕДТА, најчешће се користи за електрофорезу агарозног гела за испитивање ДНК производа.
Врсте ензима рестрикције
Постоје три различита типа рестрикцијских ензима. Тип И одсече ДНК на случајним локацијама чак до 1000 или више базних парова са локације за препознавање. Тип ИИИ сече на око 25 базних парова са локације. Врсте И и ИИИ захтевају АТП и могу бити велики ензими са више подјединица. Ензими типа ИИ, који се претежно користе у биотехнологији, смањују ДНК унутар препознате секвенце без потребе за АТП и мањи су и једноставнији.
Ензими за рестрикцију типа ИИ се именују према бактеријским врстама из којих су изоловани. На пример, ензим ЕцоРИ је изолован из Е. цоли . Већина људи је упозната са избијањима Е. цоли у храни.
Ензими за ограничавање типа ИИ могу генерисати два различита типа резова у зависности од тога да ли су обојице урезали у центар секвенце препознавања или сваке низе ближе једном крају препознатљиве секвенце.
Први рез ће генерисати "тупе крајеве" без нуклеотидних надвишаја. Овај други генерише "лепљиве" или "кохезивне" крајеве, јер сваки од последичних фрагмената ДНК има надувавање које комплимира друге фрагменте. Оба су корисна у молекуларној генетици за израду рекомбинантне ДНК и протеина.
Овај облик ДНК се издваја из разлога што је произведен лигацијом (повезивањем) две или више различитих жица које нису изворно повезане заједно.