Овај пуфер се користи за сепарацију ДНК електрофорезе
ТБЕ пуфер је нарочито користан за одвајање мањег фрагмента ДНК (МВ <1000), као што су мали производи рестрикционих ензимских дигестера.
ТБЕ има већи капацитивни капацитет и даје више резолуцију од ТАЕ бафера . ТАЕ пуфер је раствор који се састоји од базе Трис, сирћетне киселине и ЕДТА (Трис-ацетате-ЕДТА).
ТБЕ је генерално скупљи од ТАЕ и инхибира ДНК лигазу, што може проузроковати проблеме ако су намијењени сљедећи кораци за пречишћавање ДНК и лигације. Са три једноставна корака која следи, научите како направити ТБЕ пуфер. Не би требало да траје више од око 30 минута да направите овај бафер. Ево како:
Припремите залиху ЕДТА
Предодручно треба припремити ЕДТА (етхиленедиамине тетраацетиц ацид) раствор. ЕДТА не иде у потпуности у раствор док се пХ не подеси на око 8,0. За стоцк-раствор од 500 милиграма од 0,5 М ЕДТА, тежине 93,05 грама ЕДТА динатријеве соли (ФВ = 372,2). Затим га растворите у 400 милилитара деионизиране воде и подесите пХ са НаОХ. Након тога допуните раствор до коначног волумена од 500 милилитара.
Припремите стоцк решење за ТБЕ
Направите концентровани (5к) основни раствор ТБЕ тежином 54 грама базе Трис (ФВ = 121,14) и 27,5 г борове киселине (ФВ = 61,83) и растворити у око 900 милилитара деионизиране воде. Затим додајте 20 милилитара 0.5 М ЕДТА (пХ 8.0) и прилагодите раствор до финалног запремина од 1 литра.
Овај раствор се може чувати на собној температури, али се у старијим растворима ствара талог. Чувати пуфер у стакленим флашама и одбацити ако се талог створи.
Припремите радно решење ТБЕ-а
За електрофорезу агарозног гела, ТБЕ пуфер се може користити у концентрацији од 0,5к (размножавање концентрације 1:10). Разређен стоцк раствор 10к у деионизираној води. Коначне концентрације раствора су 45 мМ Трис-бората и 1 мМ ЕДТА. Буфер је сада спреман за употребу у покретању агарозног гела .
Шта вам је потребно
Да би направили ТБЕ пуфер, биће вам само четири супстанце. Преостале ставке на овој листи су опрема. Ове четири потребне супстанце су ЕДТА динатријумова со, база Трис, борова киселина и деионизована вода.
Што се тиче опреме, требат ће вам пХ метар и стандарди за калибрацију, по потреби. Поред тога, требат ће вам 600-милилитарска и 1500-милилитарска чаша или бочице. Заокруживање ваших потреба за опремом су дипломирани цилиндри и мешање шипки и мешања плоча.
Проверите инвентар у лабораторији коју ћете користити како бисте били сигурни да имате све што вам је потребно прије него што почнете. Ништа није горе него што треба да се зауставиш усред припреме решења, јер си нестао са одговарајућим материјалима.
Ако је ваша лабораторија у школи или на радном месту, проверите са одговарајућим особљем да видите да ли имају све ставке на залихама. Тиме ћете уштедјети време и енергију на крају.