Како направити овај имунохистокемијски бубрег за бојење
Фосфатни пуфер (ПБС) је пуферно решење које се обично користи за имунохистохемијско (ИХЦ) бојење и често се користи у биолошким истраживањима. ПБС је водени раствор соли који садржи натријум хидрогенфосфат, натријум хлорид и, у неким случајевима, калијум хлорид и калијум дихидроген фосфат.
Имунохистокемијско бојење
Имунохистокемија се односи на процес откривања антигена као што су протеини у ћелијама ткивног дела коришћењем принципа антитела који се специфично везују за антигене у биолошким ткивима.
Имунофлуоресцентно бојење је први имунохистохемијски метод за бојење.
Антигени постају видљиви када су коњуговани са антителима користећи флуоресцентне боје због реакције везивања антигена и антитела. Овај процес се јавља када је активиран узбудљивим светлом одређене таласне дужине под флуоресцентним микроскопом.
Осмоларност и јонске концентрације решења одговарају људском телу - оне су изотоничне.
Рецепт за ПБС
ПБС можете припремити на више начина. Постоји више формула. Неки од њих не садрже калијум, док други садрже калцијум или магнезијум .
Овај рецепт је релативно лаган. То је за 10Кс ПБС стоцк раствор (0,1М). Међутим, такође можете направити 1Кс основно решење или почети са овом 10Кс рецептом и разблажити га на 1Кс.
Цео процес траје око 10 минута.
Такође је обезбеђена могућност додавања Твеен.
Шта ћете требати направити ПБС Буффер
- Монобазни натријум-фосфат (безводни)
- Дибазни натријум фосфат (безводни)
- Натријум хлорид
- Скали и вагање чамаца
- Магнетна мешалица и мешало
- ПХ сонда која је калибрирана и одговарајућа решења за подешавање пХ вредности
- 1Л волуметријска колица
- Твеен 20 (опционо)
Како направити фосфатни пуфни салин (ПБС)
Измерити 10,9 г анхидрованог натријум фосфат дибазног (На2ХПО4), 3,2 г безводног натријум фосфата монобазног (НаХ2ПО4) и 90 г натријум хлорида (НаЦл).
Растварати у само 1Л дестиловане воде.
Подесите пХ на 7.4 и раствор довршите до коначног волумена од 1Л.
Разблажите 10Кс пре употребе и поново прилагодите пХ ако је потребно.
Можете направити ПБС раствор који садржи 0,5% Твеен 20 додавањем 5мЛ Твеен 20 у 1Л раствор.
Савети за прављење ПБС Буффера
Чувати пуфер на собној температури након што направите ПБС решење.
Не-анхидровани реагенси могу бити замењени, али ћете морати да прерачунате одговарајућу масу сваке да бисте могли да примате молекуле додате воде.
Употреба фосфатног пуферског салина (ПБС)
Фосфатни пуферски салин има мноштво употреба, јер је изотоничан и нетоксичан за већину ћелија. Може се користити за разблажење супстанци и често се користи за испирање контејнера ћелија. ПБС се може користити као разређивач у различитим методама за сушење биомолекула, јер ће молекули воде унутар њега бити структурирани око супстанце-протеина, на пример. Она ће бити "осушена" и имобилисана на чврсту површину.
ПХ остаје стабилан и конзистентан да спречи уништавање ћелија.
Танак слој воде који се везује за супстанцу спречава денатурацију или друге конформацијске промене. Карбонатни бафери могу се користити за исту сврху, али са мање ефективности.
ПБС се такође може користити за узимање референтног спектра приликом мерења адсорпције протеина у елипсометрији.