Овај Буффер користи се за проучавање ДНК покрета
Овај бафер има ниску јонску јачину и низак капацитет пуфра. Најприкладнија је за електрофорезу великих (> 20 кб) комада ДНК-а и мораће да се често замењује или рециркулише дуже (> 4 х) гел време рада.
Имајући то на уму, можда ћете желети размотрити неколико серија пуфера.
С обзиром на то да је пуфер једноставан за коришћење, а кораци се могу брзо изводити, чинећи више од једне серије истовремено не би требало да буду посебно дуготрајне или тешко извлачити. Употребом доле наведених упутстава, требало би да траје само 30 минута да се направи ТАЕ пуфер. Ево како:
Припремите залиху ЕДТА
Предодређено је ЕДТА (етхиленедиамине тетраацетиц ацид) раствор. ЕДТА не иде у потпуности у раствор док се пХ не подеси на око 8,0. За стоцк-раствор од 500 милиграма од 0,5 М ЕДТА, тежине 93,05 грама ЕДТА динатријеве соли (ФВ = 372,2). Растворити у 400 милилитара деионизоване воде и прилагодити пХ натријум хидроксидом (НаОХ). Раствор довршите до коначног волумена од 500 милилитара.
Обришите стоно решење ТАЕ-а
Направити концентровани (50к) основни раствор ТАЕ вагањем 242 грама базе Трис (ФВ = 121.14) и растварањем у приближно 750 милилитара деионизиране воде.
Пажљиво додајте 57.1 милилитара глацијалне киселине и 100 милилитара 0.5 М ЕДТА (пХ 8.0). После тога, прилагодите раствор на завршни волумен од 1 литра. Овај основни раствор се може чувати на собној температури. ПХ овог пуфера није подешен и требало би да буде око 8,5.
Припремите радно решење ТАЕ-а
Радни раствор 1к ТАЕ пуфера је направљен једноставно разређивање основног раствора за 50к у деионизованој води.
Коначне концентрације раствора су 40 мМ. Трис-ацетат и 1 мМ ЕДТА. Буфер је сада спреман за употребу у покретању агарозног гела.
Шта вам треба за Буффер
Пошто стварање ТАЕ бафера захтева само брз и једноставан скуп инструкција, број материјала који су потребни за њега није претеран. Потребна вам је само ЕДТА динатријумска со, база Трис и глацијална сирћетна киселина.
Израда бафера такође захтева пХ метре и стандарде калибрације, по потреби. Такође ће вам требати 600 милилитара и 1500 милилитара чаша или боца, као и дипломирани цилиндри. Коначно, требаће вам деионизована вода, мешати шипке и мешати плоче.
Окончање
Где планираш да направиш пуфер - на школској локацији, радном месту или на некој другој локацији, као што је твој дом? Проверите инвентар пре него што почнете да се уверите да имате све наведене материјале за ТАЕ бафер.
Ако не желите да плаћате материјале, препоручујемо вам да направите бафер изван вашег дома. Можете једноставно наручити материјале који су вам потребни на мрежи или посетите специјалну продавницу за њих.