Како замрзити-сушити бактеријску културу (лиофилизација)

Лиофилизација или сушење са замрзавањем је кратка лабораторијска процедура

Сушење са замрзавањем, такође познато као лиофилизација или криодизикација, је процес уклањања воде из производа након замрзавања (а затим се ставља под вакуум), омогућавајући да се лед измени од чврсте материје до паре, а да не пролази кроз течну фазу. Лед (или други замрзнути растварачи) се уклањају из производа кроз процес сублимације и уклањају се везани водени молекули кроз процес десорпције.

Основе лиофилизације

Један од најбољих начина за чување бактеријске, гљивичне, квасне или друге културе микроорганизма током дужег временског периода јесте коришћење процеса сушења са замрзавањем. Ова кратка лабораторијска процедура може се предузети било којим комерцијално доступним замрзивачем који ће очувати колекцију културе. Пошто је лиофилизација најкомплекснији и скупи облик сушења, процес се обично ограничава на деликатне, топлотно осетљиве материјале високе вредности. Супстанце које нису оштећене замрзавањем обично могу бити лиофилизоване, тако да је одлагање у фрижидеру непотребно.

Овај процес може потрајати само три сата и до 24 сата, не укључујући вријеме културе.

Корак по корак корака лиофилизације

1. Прво, расте култура преко ноћи или травњак микроорганизма на ЛБ или другој одговарајућој плочици агарног хранива.

2. Затим, припремите стерилне епрувете за цримп-цап са аутоклавирањем унапред, са капицама (гумени чепови) постављени лабаво на врх. Поставите папирне етикете одштампане идентификацијом културе унутар цеви пре аутоклава. Алтернативно, користите цеви са капицама намењеним за стерилност .

1. Додајте 4 мл лиофилизационог пуфера на плочу. Ако је потребно, ћелије се могу суспендовати помоћу стерилног стакла.

2. Брзо преносите суспензију културе у стерилисане бочице. Додати приближно 1,5 мл по бочици. Заптивајте гуменим поклопцем.

3. Замрзните суспензију за културу унутар бочица постављањем бочица у замрзивач -20 степени Целзиус.

1. Када се култура замрзне, припремите замрзивач тако што ћете га укључити и омогућити вријеме за стабилизацију одговарајуће температуре и вакуумских услова. Урадите то у складу са упутствима произвођача за одређени бренд сушаре за сушење веша које користите.

2. Пажљиво и асептично поставите поклопце бочице на врху бочица, тако да се у току процеса сушења са смрзавањем може избегавати влага и поставити бочице у комору за замрзавање. Нанети вакуум на комору према упутствима произвођача.

3. Дозволите културном времену да потпуно лиофилизује (осуши). Ово може трајати од неколико сати до ноћи у зависности од количине сваког узорка и колико има узорака.

4. Уклоните узорке из коморе за замрзавање у складу са упутствима произвођача и одмах заптивите бочице са гуменим качкетом, а онда врхове за цримповање.

5. Чувати колекцију лиофилизиране културе на собној температури.

Производи ће вам бити потребни

• Фрижидер
• Нутритивне или друге одговарајуће агарске плоче (и инкубатор за културу узгоја)
• Штап за стакло
• Буффер за лиофилизацију
• Бочице са гуменим врховима са гумираним зупчаницима (и затезачем за наношење капица)
• Замрзивач

<sub>Референца:

СП Сциентифиц. Основни принципи сушења са замрзавањем. хттп://ввв.спсциентифиц.цом/фреезе-дриинг-лиопхилизатион-басицс/</sub>